Au XVI^e siècle, les tentatives coloniales auxquelles les huguenots prennent part sont celles de la France Antarctique au Brésil, dans la baie de Guanabara ou Rio de Janeiro (1555-1560), et de la Floride, lors de la décennie suivante (1562-1565). Cette seconde colonie menaçait les intérêts espagnols, d’où son anéantissement en quelques semaines.

Pour se faire reconnaître des Indiens, Dominique de Gourgues, en 1568, fait chanter à ses troupes trois Psaumes, avant de passer à la vengeance. Le désastre de 1565 marque un seuil et un nouveau départ. Dès lors, l’Amérique tout entière sera divisée entre catholicisme au sud et protestantisme au nord, la Nouvelle-France canadienne exceptée.